蛋白质的鉴定
发布网友
发布时间：2022-04-23 01:23
共5个回答
热心网友
时间：2023-06-25 04:15
双缩脲反应产物双缩脲结构双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液； 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。 具体方法是： 先将双缩脲试剂A加入组织样液，摇荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。
转自百科
热心网友
时间：2023-06-25 04:15
1
范围
本方法适用于食品中粗蛋白的含量测定。
2
原理
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，
使蛋白质分解，分解的氮与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，
用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，
即为蛋白质含量。
3
试剂
3.1
试剂
3.1.1
硫酸铜
3.1.2
硫酸钾
3.1.3
硫酸
3.1.4
2%硼酸溶液
3.1.5
混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
3.1.6
40%氢氧化钠溶液。
3.1.7
0.05n硫酸标准溶液或0.05n盐酸标准溶液。
4
仪器
4.1定氮蒸馏装置
5
试样制备
5.1
精密称取
0.2～2.0g
固体样品或
2～5g
半固体样品或吸取
10～20ml
液体样品（约相当氮
30～40mg），移入干燥的
100ml
或
500ml
定氮瓶中，加入
0.2g
硫酸铜，3g
硫酸钾及
20ml
硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持质瓶内液体微沸，
至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热
0.5h。取下放冷，小心加
20ml
水。放冷后，移入
100ml
容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，
混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。
6
操作步骤
6.1装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，
加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，
用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
6.2
向接收瓶内加入
10ml2%
硼酸溶液及混合指示液1滴，
并冷凝管的下端插入液面下，吸取
10.0ml
样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以
10ml
水洗涤小烧杯使流入反应室内，
塞紧小玻杯的棒状玻塞。将
10ml40%
氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，
并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。
蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏
5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏
1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以
0.05n
硫酸或
0.05n
盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。
6.3
同时吸取
10.0ml
试剂空白消化液按6.2操作。
7
结果计算
7.1计算
(v1-v2)×n×0.014
x=
———————————
×f×100
m×10÷100
式中：
x—样品中蛋白质的含量，%；
v1—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
v2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
n—硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；
0.014—1n硫酸或盐酸标准溶液
1ml
相当于氮克数；
m—样品的质量（体积），g(ml)；
f—氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按
16%计算乘以6.25即为蛋白质，花生为5.46。
热心网友
时间：2023-06-25 04:16
斐林甲可以当双缩脲A，NaOH的浓度是相同的。CuSO2的浓度不同，所以斐林乙稀释后可以用
热心网友
时间：2023-06-25 04:16
不能，乙液需要稀释后才能又能够用于蛋白质的鉴定
热心网友
时间：2023-06-25 04:17
将斐林试剂的乙液稀释5倍就是双缩脲试剂的B液。
在实验中不能直接使用。
