第４１卷第１期 ２０１５年２月 文章编号：１０００．２８１２（２０１５）０１－００２９—０５ 兰州大学学报（医学版） ｏｆ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ） Ｖｏ１．４１ ＮＯ．１ Ｆｅｂ．２０１５ 遗传性血色病突变基因与糖代谢紊乱的关系研究 王玉平ｌａ，ｂ，成建国ｋ，孙蔚明ｋ，韩婕ｋ，程小燕 ，陈彦杏 １．兰州大学第一医院ａ甘肃省胃肠病重点实验室，ｂ消化科，Ｃ内分泌科甘肃兰州７３００００ ２．兰州大学第一临床医学院，甘肃兰州７３００００ 摘要：目的检测２例遗传性血色病患者ＨＦＥ基因突变情况，初步观察ＨＦＥ基因突变与糖代谢紊乱的关系。方法采集患 者外周血提取基因组ＤＮＡ，针对常见ＨＦＥ基因突变区域设计引物进行ＰＣＲ，测序后分析基因序列；构建野生型和突变 型ＨＦＥ基因表达载体，转染Ｌ０２细胞检测胰岛素信号通路及下游有关糖代谢关键酶的表达水平。结果２例患者均为 Ｃ２８２Ｙ Ａ／Ａ纯合突变，无Ｈ６３Ｄ／Ｓ６５Ｃ突变；过表达突变型ＨＦＥ基因的细胞Ａｋｔ磷酸化水平较弱，６．磷酸果糖激酶．１表 达水平下调而磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和葡萄糖．６．磷酸酶表达水平上调。结论ＨＦＥ基因Ｃ２８２Ｙ突变可能与患者的糖代 谢紊乱有关。 关键词：遗传性血色病；ＨＦＥ基因；基因突变；糖尿病 中图分类号：Ｒ５９６ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．１３８８５￣．ｉｓｓｎ．１０００ ２８１２．２０１５．０１．００６ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｌｙｃｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ Ｗａｎｇ Ｙｕ—ｐｉｎｇ ，Ｃｈｅｎｇ Ｊｉａｎ－ｇｕｏｋ，Ｓｕｎ Ｗｅｉ－ｍｉｎｇｋ，Ｈａｎ Ｊｉｅｋ， Ｃｈｅｎｇ Ｘｉａｏ—ｙａｎ２，Ｃｈｅｎ Ｙａｎ—ｘｉｎｇ １．ａ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｂ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ｃ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ ２．Ｆｉｒｓｔ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＨＦＥ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｗｏ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ（ＨＨ）ａｎｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ＨＨ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｇｌｙｃｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈ— ｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ＨＨ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒｓ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ＨＦＥ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃ— ｔｏｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｗｉｄｅ ａｎｄ ｍｕｔａｎｔ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ＨＦＥ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ Ｌ０２ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ． Ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｇｌｙｃｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｂｏｔｈ ｏｆ ＨＨ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ Ｃ２８２Ｙ Ａ／Ａ ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈａｄ ｎｏ Ｈ６３Ｄ／Ｓ６５Ｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｔａｎｔ ＨＦＥ ｈａｄ ｗｅａｋｅｒ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｌｅｖｅ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＫＦ１ ｗａｓ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ｗｈｉｌｅ ＰＥＰＣＫ ａｎｄ Ｇ６ＰＣ ｗｅｒｅ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃ２８２Ｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＦＥ ｇｅｎｅ ｍａｙｂｅ ｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｇｌｙｃｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｄｉｓｏｒ— ｄｅｒ ｉｎ ＨＨ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ；ＨＦＥ ｇｅｎｅ；ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ；ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ 遗传性血色病（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ， 疾病，多见于北欧地区的男性，发病率不足２％ｔ“， ＨＨ）是一种铁代谢紊乱所致的常染色体隐性遗传 我国病例罕见。本病原因为小肠铁吸收过量增 收稿目期：２０１４—１卜２０ 基金项目：兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金（１ｚｕｊｂｋｙ．２０１２—１５０）；国家自然科学基金面上项目（８１３７２１４５） 作者简介：王玉平（１９７７一），男，安徽五河人，助理研究员，博士，研究方向为疾病遗传及代谢机制，ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｕｐｉｎｇ＠ｌｚｕｅｄｕ．ｃａ ．３０ 兰州大学学报（医学版） 第４１卷 加，逐渐沉积于肝脏、皮肤、胰腺、心脏、关 超显示：（１）心脏扩大，室壁搏幅减低；（２）左 节、甲状腺、垂体、肺等，表现为相应的器官功 心收缩功能减低。诊断：（１）原发性血色病并扩 能异常口 。临床表现常见为肝功能异常、糖尿 张性心肌病；（２）继发性糖尿病；（３）甲状腺功 病、性功能低下、甲状腺机能减退、关节损伤及 能减退症。家系调查：家族其他成员无类似表现。 皮肤色素沉着等 ］。ＨＨ的发生与ＨＦＥ基因突变有 １．２样本采集 关，其突变以Ｃ２８２Ｙ（２８２位半胱氨酸突变为酪 在告知患者并得到同意后，采集患者外周静 氨酸）常见，占８０％～９０％，其次为Ｈ６３Ｄ（６３位 脉血４ ｍＬ，３０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，将血浆与血细 组氨酸突变为天冬氨酸）和￥６５Ｃ（６５位丝氨酸突 胞分装，于一８０℃保存。 变为半胱氨酸），其他突变类型少见 。 ３ ＨＦＥ基因突变检测 本研究对兰州大学第一医院收治的２例临床 １．诊断为血色病继发糖尿病患者的ＨＦＥ基因进行突 步研究。 采用血液基因组提取试剂盒（天根生化科技 ＤＮＡ。聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ。 ＰＣＲ）扩增ＨＦＥ基因的３个突变位点区域，引物 变检测，并对该基因与糖代谢紊乱的关系进行初 （北京）有限公司产品）抽提患者外周血基因组 １材料与方法 １．１一般资料 序列见表１。反应条件为９４℃预变性５ ｍｉｎ， ９４℃变性３０ Ｓ，５５ ｏＣ退火３０ Ｓ，７２ ｏＣ延伸３０ Ｓ， 患者１，男，５６岁，口干、乏力、消瘦１０年， ３５个循环，最后７２℃延伸１０ ｍｉｎ。扩增产物经 加重３月。３年前诊断为“糖尿病”。查体：皮肤 ２％琼脂糖凝胶电泳、割胶，琼脂糖凝胶回收试 色素沉着，腹软，肝脏肋骨下缘未触及，双下肢 剂盒（天根生化科技（北京）有限公司产品）回收 无水肿。实验室检查：血清铁２８．６ ｐｍｏｌ／Ｌ（正常 并纯化，装ＡｐＭＤ １８一Ｔ载体（日本ＴａＫａＲａ公司 值范围１１ ３０ ｐｍｏｌ／Ｌ），铁蛋白＞１５００ ｐｇ／Ｌ（正 产品），送美国Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司测序。 常值范围１８～３７０ ｇｇ／Ｌ）。口服葡萄糖耐量试验为 １．４ ＨＦＥ基因野生型及Ｃ２８２Ｙ突变型表达质粒构建 胰岛素缺乏。ＣＴ显示肝实质密度增高。病理检查 用Ｔｒｉｚｏｌ试剂（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品）分 结果：含铁血黄素沉着症。临床诊断：原发性血 别提取患者及健康体检者外周血单个核细胞总 色病，继发性糖尿病。 ＲＮＡ作为模板，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５引物逆转录为 患者２为患者１的胞弟，４８岁，胸闷、腹 ｃＤＮＡ，通过表２的ＰＣＲ引物扩增ＨＦＥ全长基因， 胀、腹痛半月，加重３天。１年前确诊为“２型糖 利用限制酶Ｘｈｏ Ｉ和 Ｉ装入表达质粒ｐｃＤＮＡ 尿病”并二甲双胍治疗。体检：皮肤色素沉着， ３．１／ｍｙｃ—Ｈｉｓ（一）Ｂ（美国Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司产 右肺呼吸音减低；心界略向两侧扩大，双下肢凹 品），送美国Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司测序验证。 陷性水肿。实验室检查：铁蛋白＞１５００ ｐｇ／Ｌ，三 １．５细胞培养及转染 碘甲状腺原氨酸１．０ ｎｍｏｌ／Ｌ（正常值范围１．２～ ３．１ ｎｍｏｌ／Ｌ），甲状腺素８８．８ ｎｍｏｌ／Ｌ（正常值范围 培养成人正常肝细胞株Ｌ０２，培养条件为含 ６１．８～１８１．５ ｎｍｏｌ／Ｌ），促甲状腺素２４．４３ ｇＵ／ｍＬ １０％胎牛血清（以色列Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ公司 （正常值范围０．２７～４．２ ｔｘＵ／ｍＬ），口服葡萄糖耐量 产品）的ＤＭＥＭ高糖培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司产 试验示胰岛素缺乏。Ｂ超显示：（１）肝脏弥漫性 品），置于３７℃、饱和湿度、５％ＣＯ：孵箱中培 病变；（２）胸水、腹水；（３）脾脏增大。心脏彩 养。质粒转染采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＠２０００ 表１ ＨＦＥ基因突变检测引物 第１期 王玉平，等：遗传性血色病突变基因与糖代谢紊乱的关系研究 表２构建表达质粒所需引物序列 引物序列 上游：５＇－１’ＡＡ Ｉ △ ＡＣＣＡＴＧＧＧＣＣＣＧＣＧＡＧＣＣＡＧＧ－３’ 下游：５＇－ＧＡＡ 坠 ＧＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＡＧＣＴＡＡＧＡＣＧＴＡＧＴＧＣＣＣ一３ ３１ 酶切位点 ０Ｉ ＫｐｎＩ （美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品），具体步骤参照试剂说 号通路的变化，Ｂ一肌动蛋白（１３－ａｃｔｉｎ，美国Ｓａｎｔａ 明书进行。收蛋白前８ ｈ换为无血清培养基，血清 Ｃｒｕｚ公司产品）作为内参。 饥饿后加入胰岛素（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品）刺 １．７荧光定量ＰＣＲ检测 激１０ ｍｉｎ，终浓度４￣ｔｇ／ｍＬ。 １．６蛋白免疫印迹实验 将培养的细胞样本常规提取总ＲＮＡ，用随机 引物逆转录为ｃＤＮＡ，采用荧光定量ＰＣＲ仪（Ｌｉｇｈｔ 采用２×ＳＤＳ裂解液（１００ ｍｍｏｌ Ｔｒｉｓ—Ｃ１，ｐＨ ６．８， Ｃｙｃｌｅｒ ４８０，瑞士Ｒｏｃｈｅ公司产品）检测６．磷酸果 ４％ＳＤＳ，２０％甘油）充分裂解细胞获得总蛋白，常 糖激酶一１（６ ｐｈｏｓｐｈｏｆｒｕｃｔｏｋｉｎａｓｅ一１，ＰＦＫ一１）、磷 规ＳＤＳ．ＰＡＧＥ蛋白凝胶电泳分离样品 ，用ＨＦＥ抗 酸烯醇式丙酮酸羧激酶（ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒ— 体（英国Ａｂｃａｍ公司产品）检测转染蛋白的表达 ｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ，ＰＥＰＣＫ）和葡萄糖一６．磷酸酶（ｇｌｕ． 水平，用蛋白激酶Ｂ（Ａｋｔ）和磷酸化Ａｋｔ（ｐ—Ａｋｔ）抗体 ｃｏｓｅ一６一ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，Ｇ６ＰＣ）糖代谢相关基因的表 （美国Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司产品）检测信 达水平。ＰＣＲ引物序列见表３。表３糖代谢相关基因ＰＣＲ引物 １．８统计学方法 患者１ Ｍ ｌ ２ ｌ 患者２ ２ 采用Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ５统计软件包进行数据 分析。计量资料以均数４－标准差（ －４－ｓ）表示， 组间差异采用ｆ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意 义。 ２结果 ２．１ ＨＦＥ基因突变检测 Ｍ：ＤＬ２０００ ＤＮＡ分子量标准；１：Ｈ６３Ｄ／Ｓ６５Ｃ；２：Ｃ２８２Ｙ 图１ ＨＦＥ基因突变检测扩增产物 以患者基因组ＤＮＡ为模板，采用表１所列的 ２．２ ＨＦＥ基因突变对胰岛素信号通路的影响 突变检测引物进行ＰＣＲ扩增，经琼脂糖凝胶电泳 培养的Ｌ０２细胞经转染野生型和突变型ＨＦＥ 检测得到清晰的条带，见图１。所得ＰＣＲ产物装 基因表达载体后，在血清饥饿和胰岛素刺激后， 入Ｔ载体后送公司测序，结果如图２所示。所测 蛋白免疫印迹技术证实突变型ＨＦＥ基因会引起 序列与美国国家生物技术信息中心（ＮＣＢＩ）数 据库中ＨＦＥ ｍＲＮＡ序列ＮＭ ０００４１０．３进行比 Ａｋｔ蛋白４７３位丝氨酸磷酸化水平的减弱，说明过 对，证实２例患者均为Ｃ２８２Ｙ Ａ纯合突变，而 表达突变型ＨＦＥ基因能够引起Ｌ０２细胞对胰岛素 无Ｈ６３Ｄ／Ｓ６５Ｃ突变。 信号的反应减弱，见图３。 第１期 参考 文献 王玉平，等：遗传性血色病突变基因与糖代谢紊乱的关系研究 ３３ 【７］Ｇｏｓｗａｍｉ Ｌ Ａｎｄｒｅｗｓ Ｎ Ｃ．Ｈｅｒｅｄｉｔａｙ ｒｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＦＥ，ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｓｕｇ－ ‘［１］Ｅｍａｎｕｅｌｅ Ｄ，Ｔｕａｓｏｎ Ｉ，Ｅｄｗａｒｄｓ Ｑ ＨＦＥ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｓｔｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｉｒｏｎ ｓｅｎｓ－ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ：ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｎｕｒｓｅ ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００６，２８１（３９）：２８４９４—２８４９８． ［８】Ｂｈａｔｔ Ｌ，Ｈｏｒｇａｎ Ｃ Ｐ，Ｗａｌｓｈ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅ－ ｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ＨＦＥ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｂｅｔａ ２．．ｍｉ．． ｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｌｏｃａｌｉｓｅ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ ｔｏ ｔｈｅ ｅｎｄｏｓｏｍａｌ・－ｒｅ・－ ｃａｒｅ ｓｅｔｔｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ａｓｓｏｃ Ｎｕｒｓｅ Ｐｒａ，２０１４，２６（３）： ｌ１３—１２２． 【２】Ｆａｒｇｉｏｎ Ｓ，Ｖａｌｅｎｔｉ １，Ｆｒａｃａｎｚａｎｉ Ａ Ｌ．Ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｃｙｃｌｉｎｇ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ［Ｊ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈ Ｒｅｓ Ｃｏ，２００７， ｇｅｎｅ（ｈｆｅ）ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｒｉｓｋ：ｅｘｐａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｃｌｉｎ— ｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｉｒｏｎ ｏｖｅｒｌｏａｄ［Ｊ］．Ｈｅｐａ— ｔｏｌｏｇｙ，２０１０ ５１（４）：１１１９—１１２１． ［３】Ｂｒｉｓｓｏｔ Ｐ Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ， ２０１３．１８（６）：３６９－３７０． ［４］Ｗａｎｇ Ｙ Ｐ，Ｈｕａｎｇ Ｌ Ｓｕｎ Ｗ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ＥＧＦＲ／ＥＲＫ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕ— ｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］＿Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ，２０１３，３３７（１）：９６—１０６． ［５】Ｂｅｕｔｌｅｒ Ｅ，Ｇｅｌｂａｒｔ Ｔ，Ｗｅｓｔ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ【Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｄｉｓ， １９９６。２２（１６）：１８７－１９４． ［６］Ｋｕｃｉｎｓｋａｓ Ｌ，Ｊｕｚｅｎａｓ Ｓ，Ｓｖｅｎｔｏｒａｉｔｙｔｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖａ一 １ｅｎｃｅ ｏｆ Ｃ２８２Ｙ Ｈ６３Ｄ．ａｎｄ￥６５Ｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｅｒｅｄｉ． ｔａｒｙ ＨＦＥ－－ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｌｉｔｈｕａｎｉａｎ ｐｏｐｕｌａ。＿ ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１２，９１（４）：４９１—４９５． ３５９（２）：２７７—２８４． ［９］钱忠明，康友敏，常彦忠，等．ＨＦＥ蛋白与遗传性血色 病［Ｊ】．中国病理生理杂志，２００６，２２（２）：４０８—４１１． 【１Ｏ］罗文翰，汤文章，高林，等．糖尿病１１例死亡原因分析 ［Ｊ】．兰州医学院学报，１９８４，４：４２—４５． ［１１］Ｗｏｏｄ Ｍ Ｊ，Ｐｏｗｅｌｌ Ｌｗ Ｄｉｘｏｎ Ｊ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｏｆａｃ— ｔｏｒｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ： ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１２，５６ （３）：９０４—９１１． 【１２］Ｈｕａｎｇ Ｌ Ｗａｎｇ Ｙ Ｐ，Ｗｅｉ Ｂ ｅｔ ａ１．Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ＩＲＴＫＳ ａｓ ａｎ ａｄａｐｔｏｒ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．ＣｅｌｌＲｅｓ，２０１３，２３（１１）：１３１０—１３２１． ［１３］ＰｅｒｒｙＲ Ｊ，ＳａｍｕｅｌＶ Ｔ’ＰｅｔｅｒｓｅｎＫ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆｈｅ— ｐａｔｉｃ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅ— ｔｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１４，５１０（７５０３）：８４—９１．