生物活性化学检测法

发布网友发布时间：2024-08-27 11:58

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热心网友时间：2024-08-27 12:37

生物活性化学检测法提供了多种细胞活力和蛋白质含量的测定方法，以下是两种主要的检测手段。

首先，四唑盐（MTT）比色法是通过测量活细胞中MTT还原成蓝紫色结晶物的量来评估细胞活力。具体步骤如下：

将细胞消化并制成单细胞悬液，调整至1x10^9个/L。
接种到96孔培养板，培养3-5天后加入MTT溶液，孵育3-6小时后，用SDS-HCl溶解结晶物。
使用酶联免疫检测仪测量490nm波长下的吸光度，绘制细胞生长曲线。

为了保证结果准确性，需预先测定细胞贴壁率和倍增时间，优化接种细胞数和培养时间。

考马斯亮蓝测定法用于细胞蛋白质含量测定，步骤包括：

消化细胞，调整到1x10个/ml，接种到24孔板，培养后裂解细胞。
与考马斯亮蓝染液混合，放置后在595nm波长处测定OD值，绘制标准曲线计算蛋白质含量。

而对于细胞蛋白质合成测定，H-亮氨酸掺入法是通过追踪标记氨基酸H-亮氨酸的摄入，了解蛋白质合成情况：

将对数生长期细胞接种，加入预热的H-亮氨酸，培养后离心处理并收集上清。
用三氯醋酸和NaOH处理后，测定每分钟脉冲数，表示为cpm/10细胞或cpm/mg蛋白。