控的新型抑癌基因。ＰＴＥＮ基因（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ ｔｅｎｓｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇ ｄｅｌｅｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １０）是目前 发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。本文应 用ｓＰ免疫组化技术，检测了抑癌基因ｐ１６、ＰＴＥＮ 在６７例食管鳞癌组织中的表达情况。 １材料与方法 按试剂盒说明书规定方法进行免疫组化染色及 食管癌组织中ｐ１６和ＰＴＥＮ蛋白表达的检测。肿瘤 标本切成４ ｍ厚连续切片，常规脱蜡、水化、ＤＡＢ 显色，用透明中性胶封片。用已知的食管癌病例作 为阳性对照，采用ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照。 １．３．２ 结果判定方法 １．１材料 ６７例食管癌标本取自青海大学附属医院２００６ 年１１月至２００８年３月手术切除标本，其中男性４８ 例，女性ｌ９例，年龄在４０～７２，平均（５８．０４ ４－４．７６） 岁。所有病例就诊前均未经任何放疗、化疗。６７例 均经病理组织学确诊为鳞状细胞癌，其中Ｉ级２７ 例，Ⅱ级２１例，Ⅲ级１９例；２０例（浅层组）肿瘤浸 润黏膜层、黏膜下层或浅肌层，４７例（深层组）肿瘤 浸润深肌层或外膜层；有淋巴结转移者２７例，无淋 巴结转移者４０例。 １．２主要试剂 ｐ１６基因的表达产物定位于细胞核，凡细胞核 呈棕黄色者则被认为是阳性细胞；ＰＴＥＮ阳性显色 为棕色，定位于细胞质或胞核。随机选择１０个高倍 视野，计数１００个肿瘤细胞，计算阳性细胞百分率， ｐ１６、ＰＴＥＮ阳性细胞占肿瘤细胞≥２５％者为阳性， ＜２５％者为阴性。 １．４统计学处理方法 应用ＳＰＳＳ１１．５软件对实验数据行ｘ 检验，方 差分析及Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析。检验水准ｏ【＝０．０５。 ２结果 ２．１ 食管鳞癌组织中ｐ１６蛋白和ＰＴＥＮ蛋白的表 达情况 鼠抗人ｐ１６单克隆抗体，美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司 产品，鼠抗人ＰＴＥＮ单克隆抗体，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司产 品，ｓＰ免疫组织化学试剂盒，美国ＺＹＭＥＤ公司产 品。以上试剂均购自北京中杉公司。 １．３方法 ６７例食管鳞癌组织中ｐ１６蛋白表达的阳性率 为４７．８％（３２／６７）；ＦＦＥＮ蛋白表达的阳性率为 ５８．２％（３９／６７）。 ‘ ２．２ ｐ１６和ＰＴＥＮ蛋白表达与食管鳞癌临床病理 特征的关系（见表１） ｐ１６和ＰＴＥＮ蛋白表达与食管鳞癌各临床病理特征间的关系 １．３．１实验方法 表１ １８６ 维普资讯 http://www.cqvip.com ２．３ ｐ１６和ＰＴＥＮ蛋白在食管鳞癌中表达的相关 中起重要作用。 性（见表２） 分析临床病理资料发现，ｐ１６、ＰＴＥＮ蛋白表达 表２ ｐ１６和ＰＴＥＮ表达的相关性 水平在食管鳞癌的深层浸润、有淋巴结转移者表达 水平降低（见表１），提示上述蛋白检测可作为预测 肿瘤转移潜能和预后的参考指标。我们研究发现， 在食管鳞癌中ｐ１６的表达与ＰＴＥＮ表达呈正相关（ｒ ＝０．７８２，Ｐ＜０．００５），表明两种基因在食管鳞癌的 发生和转移过程中具有协同作用，其作用机理尚需 进一步研究。 ３讨论 参考文献 正常细胞内的ｐ１６蛋白是ＣＤＫｓ的抑制蛋白， ［１］Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ Ｔ，Ｆｎｊｉｉ Ｈ，Ａｒａｋａｗａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｌｏｓｓ ｏｆｈｅｔ— 能特异性地在Ｇ１卡点中与ｃｙｃｌｉｎＤ１竞争结合 ｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｓ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｇｅ— ＣＤＫ４／６，抑制ｃｙｃｌｉｎＤ１／ＣＤＫ４／６复合物的蛋白激酶 ｎｅｔｉｃ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｓａｒｃｏｍａ 活性，阻止细胞通过Ｇ１／Ｓ期限制点进入ｓ期，细胞 ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ，２００４，３５：３２２—３２７ 停滞在Ｇ１期，从而使细胞的生长受到抑制。ｐ１６蛋 ［２］Ａｒｂｉｓｅｒ ＪＬ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ｂｙ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｅ— 白表达缺失可出现于多种恶性肿瘤组织中，因此 ｄｉｃｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｓｙｎｅｒｇｙ ｉｎ ｄｉｖｅｒｓｅ ｎｅｏ— ｐ１６基因又称多瘤抑制基因 Ｊ。在肿瘤细胞内，ｐ１６ ｐｌａｓｍｓ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ，２００４，１４（２）：８１—９１ 基因出现突变、缺失或启动子区异常甲基化后可导 ［３］Ｏｈｔａｎｉ Ｎ，Ｙａｍａｋｏｓｈｉ Ｋ，Ｔａｋａｓｈｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ 致ｐ１６蛋白的非正常表达，出现ｃｙｃｌｉｎＤ１与ＣＤＫ４／６ ｐｌ６ＩＮＫ４ａ—ＲＢ ｐａｔｈｗａｙ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｎｅｓ— 结合增加，使细胞增殖失控，从而导致肿瘤发生 Ｊ。 ｅｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｍｅｄ Ｉｎｖｅｓｔ，２００４，５１（３— 在本研究中，有淋巴结转移组及浸润程度深层组 ４）：１４６—１５３ ｐ１６蛋白的阳性表达率明显低于无淋巴结转移组及 ［４］Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｈ，Ｏｚａｗａ Ｓ，Ａｎｄｏ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ａｌｔｅｒｅｄ ｐ１６／ 浸润程度浅层组，与Ｔａｋｅｕｃｈｉ的研究结果相似 Ｊ， ＭＴＳ１／ＣＤＫＮ２ ａｎｄ ｃｙｃｌｉｎＤ１／ＰＲＡＤ一１ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏ— 即ｐ１６蛋白对食管癌的浸润和转移有抑制作用。研 ｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｅ— 究发现，在肺癌、垂体腺瘤 Ｊ、胆管癌＿６ 等中存在 ｓｏｐｈａｇｕｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９７，３（１２Ｐｔ１）：２２２９—２２３６ ｐ１６基因缺失、突变及启动子区甲基化，表明在肿瘤 ［５］Ｂｅｌｌｏ ＭＪ，Ｄｅ Ｃａｍｐｏｓ ＪＭ，Ｉｓｌａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＣｐＧ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ａｄｅｎｏｍａｓ：ｆｒｅ— 形成过程中ｐ１６基因起着相当重要的作用。Ｙｏｏ ｑｕｅｎｔ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ一８［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ，２００６，１５（２）： 等Ｈ 用组织微阵列的方法分析发现，在非小细胞肺 ４４３—４４８ 癌中ｐ１６阳性病例５年生存率显著高于阴性病例， ［６］Ｈｏｎｇ ＳＭ，Ｃｈｏｉ Ｊ，Ｒｙｕ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｈｙｐｅｒｍｅｔｈ— 表明ｐ１６表达与患者的预后密切相关。 ｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐ１６ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｌｏｓｓ ｏｆ ｉｔｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｃｏｒｒｅ— ＰＴＥＮ可通过抑制肿瘤血管生成而抑制肿瘤生 ｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｂｉｌｅ ｄｕｃｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ 长、侵袭和转移。 研究表明ＰＴＥＮ基因在维持细胞 ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ，２００６，１３０（１）：３３—３８ 的增殖、分化和凋亡平衡中起重要作用，并可能参与 ［７］Ｙｏｏ Ｊ，Ｊｕｎｇ Ｊ，Ｌｅｅ Ｍ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ 调节细胞生长，肿瘤浸润、转移和血管形成。［ 本实 ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ 验结果证实Ｐ－ＦＥＮ蛋白阳性表达率均随癌组织浸润 ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｋｏｒｅａｎ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，２００７，２２：３１８ —３２５ 深度的加深而明显降低（Ｐ＜０．０５），且在有淋巴 结转移的癌组织中的表达明显低于无淋巴结转移的 ［８］邱镇，崔飞伦，许传亮，等．联合ＰＴＥＮ和Ｐ２７抑制 前列腺癌侵袭和血管生成的实验研究［Ｊ］．中华男科学杂志， 癌组织（Ｐ＜０．０５），此结果提示ＰＴＥＮ蛋白的异常 ２００７，１３（３）：２０１ 表达与食管鳞状细胞癌的浸润及淋巴结转移密切相 ［９］Ｓｉｍｐｓｏｎ Ｌ，Ｐａｒｓｏｎｓ Ｒ．ＰＴＥＮ：ｌｉｆｅ ａｓ ａ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓ— 关。本研究结果还显示，ＰＴＥＮ蛋白表达阳性率随 ｓｏｒ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２００１，２６４（１）：２９ 食管鳞状细胞癌分化程度的降低而明显下降（Ｐ＜ 收稿２００８—０５—２６ ０．０５），提示ＰＴＥＮ基因在诱导肿瘤细胞分化过程 ｌ８７
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